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液相色譜法測定紅豆杉組織培養(yǎng)物中 sinenxans含量方法

更新時間:2012-02-28      點擊次數(shù):3934

儀器與試劑Shimadzu LC-6A型液相色譜儀;SPD6AUV檢測器;CR3A型積分儀。
甲醇為優(yōu)級純北京化工廠;乙腈為色譜純天津四友生物醫(yī)學技術(shù)開發(fā)公司;水為雙蒸水。三者均經(jīng)G5漏斗過濾。2 對照品的制備
分別精密稱取sinenxan A、sinenxan Bsinenxan C1.0mg,以甲醇配
制成1.0mg/mL的對照品混合溶液。
Sinenxan A、sinenxan Bsinenxan C均從紅豆杉(Taxus chinensis)組織培養(yǎng)物中分離得到其結(jié)構(gòu)由NMRMS確定,其純度經(jīng)HPLC測定均達到99.0%以上。3 色譜條件預(yù)柱:Sep-Pak C18柱;色譜柱:Spherisorb C18(5μm4.6mm×250mm)不銹鋼柱。
流動相:甲醇—乙腈—水(651520);流速:1.0mL/min;檢測波長:227nm;積分儀衰減:2;紙速:0.1cm/min;靈敏度AUFS0.02;柱溫:室溫。4 樣品液的制備 收獲待測的培養(yǎng)物,在60℃以下烘干至恒重,研細,過40目篩為樣品。
精密稱取1.0g,以石油醚(6090—丙酮(520)超聲波提取30min,過濾。濾渣以丙酮洗滌3次。合并濾液,濃縮至干得粗提物。以1.0mL甲醇溶解,吸取50μL加于Sep-Pak C18預(yù)柱端。分別以水、70%甲醇和90%甲醇各4mL洗脫。收集90%甲醇洗脫液,蒸干溶劑,以甲醇定容1mL為樣品液。5 對照品的保留時間吸取sinenxan A、sinenxan Bsinenxan C的對照品混合溶液10μL進樣.

回收率試驗 精密稱取1.0g已知含量的樣品,按照“樣品液的制備”項下“以石油醚(6090—丙酮(520)超聲波提取30min”至“濃縮至干得粗提物”的方法操作,精密吸取10μL對照品混合溶液,加入所得粗提物中,按照“樣品液的制備”項下“以1.0mL甲醇溶解”至“以甲醇定容1mL為樣品液”的方法操作,制成回收試驗樣品液。
精密吸取回收試驗樣品液2μL進行測定,所得結(jié)果代入回歸方程,計算回收率。sinenxan A、sinenxan Bsinenxan C的平均回收率(n=3)分別為:(104.4±0.41)%、(103.7±0.47)%、(99.04±0.52)%8 樣品測定 精密吸取按“樣品液的制備”項下方法制備的樣品液2μL進行測定,所得結(jié)果代入回歸方程,計算含量。每個樣品進樣2次,以平均數(shù)為測定結(jié)果。

討論
9.1 流動相的選擇 根據(jù)文獻報道[2]及作者實驗總結(jié),運用HPLC進行紫杉烷類成分的分析測定,流動相的組成以甲醇—乙腈—水為較好,其中,乙腈與水的比例決定著色譜峰的形狀及分離效果,甲醇決定著色譜峰的保留時間(tR)。針對本文sinenxans的測定,選定配比為651520的甲醇—乙腈—水作為*流動相。若減小甲醇的比例,將會延長樣品的測定時間,且較后出峰的sinenxan C會出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象;如增大甲醇的比例,sinenxan各色譜峰的保留時間均可顯著縮短,然而在進行樣品分析時,由于存在其他成分色譜峰的干擾,會影響測定結(jié)果的準確度。
9.2 被測組分的含量水平會因培養(yǎng)物樣品之間存在較為顯著的差異而有所不同??筛鶕?jù)具體情況調(diào)整樣品液的濃度和/或進樣量,以滿足樣品的測定要求,得到準確的測定結(jié)果

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